sEPCR試劑盒說明書檢測范圍：
人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動物細(xì)胞因子、植物細(xì)胞因子、骨代謝、細(xì)胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。
服務(wù)：免費代測，免費索取產(chǎn)品說明書、免費技術(shù)指導(dǎo)等。
檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。
ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等。
存放環(huán)境：2-8℃，避光防潮保存。
產(chǎn)品名稱：sEPCR試劑盒說明書
英文縮寫：sEPCR
性狀：盒裝液體。
保存溫度： 2~8℃。
檢測范圍：見說明書靈敏度（以隨貨英文說明書為主）。
說明書:說明書隨貨發(fā)送，您也可以直接聯(lián)系我司在線銷售人員索取。
特點：靈敏性高，高效性，吸附均勻，吸附性好，回收利用率高，是一款可以讓您放心選購的elisa試劑盒產(chǎn)品。
用途：用于測定人血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。
sEPCR試劑盒說明書樣品收集、處理及保存：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104 -106 /ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或 者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上 清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。
7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo) 本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解 凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
sEPCR試劑盒說明書樣本實驗前準(zhǔn)備：
elisa試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞 培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。 仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分 鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如 有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保 存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分 ）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀 釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃 取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/ 分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS， PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入 一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿 化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢 測，其余冷凍備用。
GOY-00019164Anti-E2F5 轉(zhuǎn)錄因子E2F-5抗體特價促銷規(guī)格： 0.2ml
GOY-00019165Anti-E2F6 轉(zhuǎn)錄因子E2F6抗體特價促銷規(guī)格： 0.1ml
GOY-00019166Anti-E2 tag E2 tag標(biāo)簽抗體特價促銷規(guī)格： 0.1ml
GOY-00019167Anti-HPV16 E7 protein 人瘤病毒16型E7抗體特價促銷規(guī)格： 0.2ml
GOY-00019168Anti-EAAT1/Glast 膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運載蛋白1抗體特價促銷規(guī)格： 0.1ml
GOY-00019169Anti-EAAT2 膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運載蛋白2抗體特價促銷規(guī)格： 0.2ml
GOY-00019170Anti-EAAT3 膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運載蛋白3抗體特價促銷規(guī)格： 0.1ml
GOY-00019171Anti-EBNA 3A EB病毒核抗原-3A抗體特價促銷規(guī)格： 0.2ml
GOY-00019172Anti-ECE1 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體特價促銷規(guī)格： 0.1ml
GOY-00019173Anti-ECE2 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2抗體特價促銷規(guī)格： 0.2ml
GOY-00019174Anti-ECG2 食道癌相關(guān)基因抗體特價促銷規(guī)格： 0.1ml
GOY-00019175Anti-ECM1 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1抗體特價促銷規(guī)格： 0.2ml
GOY-00019176Anti-ECP 嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白抗體特價促銷規(guī)格： 0.2ml
GOY-00019177Anti-ED-1 外胚層發(fā)育不良抗體特價促銷規(guī)格： 0.1ml
人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體Elisa試劑盒，sEPCR試劑盒 ，現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量可靠，任何質(zhì)量問題可包退包換，提供技術(shù)支持，售后服務(wù)，提供免費代測服務(wù)。詳情請來電咨詢。
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體Elisa試劑盒，sEPCR試劑盒 ，計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體Elisa試劑盒，sEPCR試劑盒 ，注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
部分相關(guān)試劑盒如下：
大鼠乙醛脫氫酶（ALDH）Elisa試劑盒
大鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原14（sCD14）Elisa試劑盒
大鼠多巴胺D2受體（D2R）Elisa試劑盒
大鼠白細(xì)胞分化抗原44（CD44）Elisa試劑盒
大鼠凝血因子Ⅻ（FⅫ）Elisa試劑盒
大鼠凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ）Elisa試劑盒
大鼠凝血因子Ⅲ（FⅢ）Elisa試劑盒
大鼠白介素2受體（IL-2R）Elisa試劑盒
大鼠β羥丁酸（βOHB）Elisa試劑盒
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGFβ2）Elisa試劑盒
大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4（MCP-4/CCL13）Elisa試劑盒
大鼠網(wǎng)膜素（omentin）Elisa試劑盒
大鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（pERK）Elisa試劑盒
大鼠淋巴細(xì)胞因子Elisa試劑盒
大鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子（Smad1）Elisa試劑盒
大鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）Elisa試劑盒
大鼠補體因子H（CFH）Elisa試劑盒
大鼠血小板衍生生長因子BB（PDGF-BB）Elisa試劑盒
大鼠CXC趨化因子配體16（CXCL16）Elisa試劑盒
大鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子（TSGF）Elisa試劑盒
大鼠白介素27（IL-27）Elisa試劑盒
大鼠第八因子相關(guān)抗原（FⅧAg）Elisa試劑盒
大鼠P53（P53）Elisa試劑盒
大鼠環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）Elisa試劑盒
大鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4 Elisa試劑盒
大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10（IP-10/CXCL10）Elisa試劑盒
大鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1（sPECAM-1/sCD31）Elisa試劑盒
大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類（MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ）Elisa試劑盒
大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類（MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ）Elisa試劑盒
大鼠胰高血糖素樣肽1（Glp-1）Elisa試劑盒
大鼠膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）Elisa試劑盒
大鼠腦腸肽（BGP/Gehrelin）Elisa試劑盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月
人Dickkopf1Elisa試劑盒，DKK1試劑盒 ，操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
1600 pmol/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
800 pmol/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400 pmol/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 pmol/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pmol/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣稀釋液40μl，
然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
歡迎前來咨詢訂購。
極速PCR試劑盒根據(jù)PCR反應(yīng)原理，精確提供PCR反應(yīng)所需的全部試劑（包括Taq DNA聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖液、MgCl2、dNTPs、引物Ⅰ、引物Ⅱ、模板質(zhì)粒），整個反應(yīng)過程只需要1860秒。大大節(jié)約PCR實驗實驗，實現(xiàn)了PCR單課時完成實驗的想法！ O速PCR試劑盒還精確提供了PCR反應(yīng)體系中各種成分的量，以及提供實驗反應(yīng)參數(shù)，實驗開展時只需按照說明書上的量取各種成分，并在全自動PCR儀上設(shè)置反應(yīng)參數(shù)即可完成PCR擴增實驗。產(chǎn)品優(yōu)勢： 1、將繁瑣的實驗簡單化，提供實驗所需的全套試劑和實驗相關(guān)的反應(yīng)參數(shù)！ 2、為中學(xué)教學(xué)特點量身打造，整個反應(yīng)只需31分鐘，大大縮短了反應(yīng)時間。使用極速PCR試劑盒開展實驗vs 常規(guī)方法開展實驗 產(chǎn)品應(yīng)用：試劑盒支持高中生物分子生物學(xué)實驗。
試劑盒名稱：大鼠sEPCR試劑盒
英文簡稱：大鼠sEPCRELISA KIT
英文名稱：Rat soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA KIT
規(guī)格：48人份/96人份
中文名稱：大鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原75配體ELISA試劑盒
編號：HF01707B
供應(yīng)的其他試劑盒產(chǎn)品：
HF01837B 大鼠Col Ⅳ試劑盒 大鼠Col ⅣELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠Ⅳ型膠原ELISA KIT Rat Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ ELISA KIT HF01838B 大鼠HK試劑盒 大鼠HKELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠己糖激酶ELISA KIT Rat Hexokinase,HK ELISA KITHF01839B 大鼠GSK試劑盒 大鼠GSKELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠糖原合成酶激酶ELISA KIT Rat glycogen synthase kinase,GSK ELISA KITHF01840B 大鼠u-T3試劑盒 大鼠u-T3ELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠高敏三碘甲狀腺原氨酸ELISA KIT Rat Ultrasensitivity Tri-iodothyronine,u-T3 ELISA KITHF01841B 大鼠Bid試劑盒 大鼠BidELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白ELISA KIT Rat BH3 interacting domain death agonist,Bid ELISA KITHF01842B 大鼠Casp-9試劑盒 大鼠Casp-9ELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠胱天蛋白酶9ELISA KIT Rat Caspase-9,Casp-9 ELISA KITHF01843B 大鼠Orexin A試劑盒 大鼠Orexin AELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠阿立新A ELISA KIT Rat Orexin A ELISA KITHF01844B 大鼠Casp-3試劑盒 大鼠Casp-3ELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠胱天蛋白酶3ELISA KIT Rat Caspase 3,Casp-3 ELISA KITHF01845B 大鼠Bcl-2試劑盒 大鼠Bcl-2ELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2ELISA KIT Rat B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2 ELISA KIT HF01846B 大鼠CXCR3試劑盒 大鼠CXCR3ELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠CXC趨化因子受體3ELISA KIT Rat CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISA KITHF01847B 大鼠NE試劑盒 大鼠NEELISA KIT 人骨成型蛋白受體ⅡELISA試劑盒 大鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶ELISA KIT Rat neutrophil elastase,NE ELISA KIT
中文ELISA KIT：大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體ELISA KIT
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
Avellino角膜營養(yǎng)不良（ACD）分型試劑盒 是使用多重AS-PCR方法，在LASIK或LASEK手術(shù)前快速篩查Avellino基因突變。Avellino角膜營養(yǎng)不良（ACD）熒光PCR試劑可以檢測532位點的G/A單核苷酸變異（SNP）
Avellino型角膜營養(yǎng)不良（Avellino corneal dystrophy）的正式名稱為第二型顆粒狀角膜營養(yǎng)不良 （Granular Corneal dystrophy type II）。因1988年發(fā)現(xiàn)于來自意大利阿韋利諾地區(qū)移民過來的家庭而得名。其實, 1988年以前該病已經(jīng)存在于全世界, 在歐洲則不區(qū)分與第一型顆粒狀角膜營養(yǎng)不良, 而被統(tǒng)稱為顆粒狀角膜營養(yǎng)不良。Avellino型角膜營養(yǎng)不良是一種兩眼角膜中心部位出現(xiàn)混濁的疾患, 是優(yōu)先遺傳常染色體的遺傳疾患。已知βigh3 gene特定部位的突變?yōu)樵摷膊〉闹饕? 發(fā)生這種基因突變的人的角膜等傷口部位會出現(xiàn)蛋白質(zhì)積淀。 βigh3基因變異角膜營養(yǎng)不良癥中最常見的Avellino型角膜營養(yǎng)不良癥, 患者在12歲左右開始角膜就會出現(xiàn)白色斑點, 并隨著患者年齡的增加, 白色斑點數(shù)也增多增大, 進(jìn)而因視力減退, 閃光, 亮度對比減退加深暗視等癥狀。目前, 韓國存在約40000人的異形接合子, 而最近在這種異形接合子中出現(xiàn)很多癥狀嚴(yán)重的情況。而且, 對于異形接合子來說, 在進(jìn)入20歲和30歲時, 由于個人差異以及使用隱形眼鏡等生活環(huán)境的不同, 可能看不見長在角膜的白斑, 在這種情況下進(jìn)行鐳射或Lasek等視力矯正手術(shù), 就可能會導(dǎo)致視力急劇下降的情況, 因此必須要在事前通過檢查, 確定是否有Avellino型角膜營養(yǎng)不良癥基因的突變。 以解剖學(xué)的判斷眼睛異常的裂隙燈顯微鏡檢查為主, 此外, 為了確認(rèn)伴隨的其它異常, 進(jìn)行視力, 眼壓, 眼底攝影、眼淚分泌檢查。但是，由于需要熟練的眼科專門醫(yī)生的診斷, 因個人生活環(huán)境的不同, 是否長時間戴眼鏡，以及生活環(huán)境和因人而異等, 可能被發(fā)現(xiàn)的程度不一樣, 因此, 可能會出現(xiàn)主觀性診斷，并很難得出準(zhǔn)確的結(jié)果。測序為主的分子診斷方法耗時費力，不宜作為常選方法。本試劑盒應(yīng)用實時熒光PCR方法可在檢查同日取得結(jié)果，快速、準(zhǔn)確。
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的優(yōu)越性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化，突變率穩(wěn)定，突變沒有趨向性。易錯PCR的突變率為0.66%（±0.13%），詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡單，但如果在PCR引物中設(shè)計位點，則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體，也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易錯PCR的產(chǎn)物用作下一次易錯PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
更多產(chǎn)品信息，請點擊：http://www.tiandz.com/產(chǎn)品
高GC納米PCR試劑盒首選上海滬崢
產(chǎn)品目錄號：NHS21-5
高GC納米PCR試劑盒產(chǎn)品說明：本試劑盒既適用于高GC序列的擴增，也適用于一般PCR擴增。產(chǎn)品定位于解決目前市場上難于擴增的若干PCR反應(yīng)。納米PCR是納米材料輔助的基因擴增技術(shù),研究表明某些納米材料可以增強基因擴增的總體效率。
高GC納米PCR試劑盒25ul/250次 配置如下：
2×NanoPCR buffer 11-1 (1000ul)；
2×NanoPCR buffer 11-2 (1000ul)；
2×NanoPCR buffer 11-3 (1000ul)；
dNTPs (2.5mM)(300ul)；
MgCl2 (25 mM) (500ul)；
Taq DNA polymerase (5 U/ul) (60ul)
使用建議:
I） 納米材料容易聚集，每次使用前請震蕩均勻再使用。PCR產(chǎn)物中含有的納米材料一般不影響電泳等后續(xù)操作。
II） 一個典型的PCR反應(yīng)（舉例：擴增一個高GC片段780bp）設(shè)計如下：
|
| 12ul反應(yīng) | 25ul反應(yīng) |
| 2×NanoPCR buffer-11 | 6.0 ul | 12.0ul |
| dNTPs (2.5 mM) | 1.0 ul | 2.0ul |
| MgCl2 (25 mM) | 1.2 ul | 2.5ul |
| Primer 1(2 uM) | 0.8 ul | 1.6ul |
| Primer 2(2 uM) | 0.8 ul | 1.6ul |
| Template DNA (~10 ng/ul) | 0.2 ul | 0.4ul |
| Taq DNA polymerase (5 U/ul) | 0.2 ul | 0.4ul |
| ddH2O | 1.8 ul | 4.5ul |
PCR程序舉例：[94℃-5min]；[94℃-30s，56℃-30s，72℃-40s]×35 cycles（循環(huán)數(shù)可按照PCR產(chǎn)物的多少適當(dāng)調(diào)節(jié)）；[72℃-5min]. 如果不確定最佳退火溫度，可以先做梯度PCR確定最佳退火溫度。
III） 批量PCR需要計算并規(guī)劃好實驗中所需要混合的mix總量以及需要單獨加入PCR體系中的成分和加量。例：做以不同基因組為模板的9管12ul體系的PCR。計入加樣損耗，按10管加量計算。試驗操作全過程建議在冰盒上進(jìn)行。
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| 12ul反應(yīng) |
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| 2×NanoPCR buffer-11 | 6.0 ul | ×10=60 |
| dNTPs (2.5 mM) | 1.0 ul | ×10=6 |
| MgCl2 (25 mM) | 1.2 ul | ×10=12 |
| Primer 1(2 uM) | 0.8 ul | ×10=8 |
| Primer 2(2 uM) | 0.8 ul | ×10=8 |
| Template DNA (~10 ng/ul) | 0.2 ul | 單獨添加 |
| Taq DNA polymerase (5 U/ul) | 0.2 ul | ×10=2 |
| ddH2O | 1.8 ul | ×10=18 |
按照上表所描述的將mix做好，并反復(fù)搖晃15-20下、上下振蕩后離心（大約待離心機轉(zhuǎn)到7000rpm隨即停下來就好），離心后，用槍頭分別加入相應(yīng)基因組0.2ul的PCR管內(nèi)，每管11.8ul并用槍頭順便混合3下使均勻。放入PCR儀進(jìn)行PCR。
實驗舉例1：擴增以人類基因組為模板的38對序列引物。該38對高GC擴增產(chǎn)物GC>60%,大小均在700-800bp左右。38對退火溫度基本一致。使用上述12ul擴增體系， 使用NanoPCR試劑盒進(jìn)行擴增的圖片如圖1所示。
圖1 使用NanoPCR試劑盒擴增人類基因組38對引物的電泳圖片
Marker為λ/Hind Ⅲ.
圖2 使用國外某公司高GC試劑盒擴增人類基因組38對引物的電泳圖片
圖3 使用國內(nèi)某公司高GC試劑盒擴增人類基因組38對引物的電泳圖片
參考文獻(xiàn)：
Haikuo Li etal. Nanoparticle PCR: Nanogold-assisted PCR with enhanced specificity. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44(32):5100-3
Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanopowder enhances the efficiency of polymerase chain reaction. Nanotechnology, 18 (2007) 355706
Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanotubes enhances the efficiency of long PCR. 2008, Biotechniques, 44(4):537-545
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